Pruebas de sensibilidad de microorganismos o antibiograma
El antibiograma es la prueba microbiológica que se realiza para determinar la susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de una bacteria a un grupo de antibióticos. En términos simples, un antibiograma es un informe que muestra el grado de susceptibilidad de las cepas de patógenos a una variedad de antibióticos.
Es una técnica realizada por alumnos de segundo curso de Laboratorio Clínico y Biomédico en clase de Microbiología Clínica en Kapital Inteligente.
El Antibiograma es una de las herramientas disponibles para los especialistas en prevención de infecciones, epidemiólogos hospitalarios y profesionales de la salud.
Los antibióticos son sustancias antimicrobianas (sustancias con capacidad de matar o al menos de inhibir el crecimiento de los microorganismos y que sea susceptible de utilización como tratamiento en los pacientes), producidas por determinados microorganismos.
Que un microorganismo sea sensible a un antimicrobiano, quiere decir que no puede crecer en presencia de este agente, por el contrario, que un microorganismo sea resistente a un antimicrobiano quiere decir que adquiere la capacidad de crecer en presencia de dicha sustancia.
Difusión con discos
Uno de los métodos más utilizados para la realización de antibiogramas es el método de difusión en discos.
Es un método cualitativo.
Los resultados generalmente se informan en una de las siguientes formas:
Sensible (S)
Intermedio (I)
Resistente (R)
El método de difusión en disco más comúnmente usado (también conocido como prueba de Kirby-Bauer) es adecuado para los microorganismos de crecimiento rápido. Se basa en la colocación de discos impregnados con antibióticos en placas de agar inoculadas con el microorganismo que está probándose. Después de la incubación (por lo general de 16 a 18 h), se mide el diámetro de la zona de inhibición que rodea a cada disco. Cada combinación de microorganismo-antibiótico tiene diámetros diferentes que implican que es S, I o R.
Material utilizado:
-
- Cultivo Puro de un microorganismo
- Placa con medio de Müller-Hinton
- Pinzas metálicas
- Discos de antibióticos
Pasos para realizar este método difusión con discos:
1. En primer lugar hay que realizar una suspensión de microorganismos en una solución salina al 0.9%. Se toma una muestra de la cepa de interés con un hisopo estéril.
Para que en la suspensión haya la cantidad de microorganismos necesarios para realizar el antibiograma, habrá que utilizar una escala de turbidez denominada escala de MacFarland (se usa como referencia en suspensiones bacteriológicas para saber que el número de bacterias por mililitro, o más bien en UFC según una escala que va de 0.5 a 10.). Estos estándares son creados al mezclar soluciones de cloruro de bario al 1% con ácido sulfúrico al 1% en volúmenes específicos, para asegurar la densidad correcta se puede controlar usando espectofotómetros.
| McFarland Standard No. | 0.5 | 1 | 2 | 3 | 4 |
| 1.0% Cloruro de bario (ml) | 0.05 | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 |
| 1.0% Ácido sulfúrico (ml) | 9.95 | 9.9 | 9.8 | 9.7 | 9.6 |
| Densidad celular aproximada (1X10^8 CFU/mL) | 1.5 | 3.0 | 6.0 | 9.0 | 12.0 |
| % Transmitancia* | 74.3 | 55.6 | 35.6 | 26.4 | 21.5 |
| Absorbancia* | 0.08 to 0.1 | 0.257 | 0.451 | 0.582 | 0.669 |
* con longitud de onda de 600 nm OD600
2. Después, se realiza una siembra por torunda de la suspensión de microorganismos en una placa de agar Müller-Hinton. Este medio de cultivo es el utilizado para la realización de antibiogramas puesto que permite el crecimiento de la mayoría de especies bacterianas importantes en clínica.
3. Una vez inoculado el microorganismo con ayuda de unas pinzas metálicas esterilizadas mediante flambeado con alcohol se depositan suavemente los discos impregnados de antibiótico en la placa y se deja incubar a 37ºC durante 24 horas en la estufa de incubación.
4. Pasado el tiempo de incubación, se observará o no, inhibición al rededor del disco impregnado de antibiótico.
Tras 24 horas, se observan los halos de inhibición. El diámetro del halo de inhibición se utiliza como indicativo de la sensibilidad o la resistencia a cada antibiótico. Midiendo ese halo de inhibición, el microorganismo se puede clasificar como:
Sensible (S)
Intermedio (I)
Resistente (R)
Vídeo explicativo antibiograma
En este vídeo podéis observar el proceso de la pruebas de sensibilidad de microorganismos o antibiograma
Este sería el resultado de otro antibiograma realizado en nuestro laboratorio: